2020/4/3
涡漩混匀器主要适用于医学、生物工程、化学、医药等研究领域,是生物实验室对各种试剂、溶液、化学物质进行固定、振荡、混匀处理的必备常规仪器,那么对于涡漩混匀器我们该如何正确使用呢?
涡漩混匀器在生物学中的分子生物学中,我们经常要做细胞质粒DNA的提取和检测的试验,以便可以获得DNA样本,或者用于电泳检测分析,了解样品中是否含有质粒DNA,并判断分子量的大小等等,因此,质粒DNA的提取是基因工程实验中最常用的手段之一。
下面先为大家什么是质粒,质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。质粒是一种染色体外的稳定遗传银子,大小从1kb到200kb不等,大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子,并以超螺旋形式存在于宿主的细胞质中。它是细菌内的共生型遗传因子,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,质粒具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。
质粒的分离是利用质粒DNA和染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,由于染色体DNA与质粒DNA拓扑构型不同,染色体DNA双螺旋结构解开,而共价闭合质粒DNA的氢键虽被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕仍会紧密地结合在仪器。当加入中和液后,溶液pH恢复至中性,在高盐浓度的情况下,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构并与蛋白质SDS复合物等形成沉淀;不同的是质粒DNA复性迅速而准确,保持可溶状态而留在上清中。这样,通过离心可沉淀大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质。除去沉淀后上清中的质粒可用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。
提取质粒DNA最常见的方法是碱裂解法,具体步骤如下:首先讲含有质粒的细菌接种到培养基,经过大约12小时的恒温摇陪后弃去上清液,加入中和液后用涡漩混匀器将溶液充分混匀,然后加入碱液进行沉淀,这就是变性与复性,最后的操作就是实验室常用的沉淀的分离、纯化。分离、纯化DNA首先取上清液,加入分离液后采用涡漩混匀器混匀溶液,离心取上清液,加入无水乙醇后混匀,离心后弃上清液,干燥DNA即可。
在这个实验中,我们需要用到涡漩混匀器进行溶液混匀,本公司生产的涡漩混匀器可满足每一个实验室的需要和安全标准,该涡漩混匀器带有光电感应,检测到仪器上方有手靠近,仪器即自动开始震动混匀,不需要施加任何外力,震动速度可调,时间可设,有“光电感应”、“连续”两种安全操作模式可选择,涡漩混匀器稳定性高,非常适合细胞质粒提取实验。
涡漩混匀器的使用方法:
在使用涡漩混匀器前,请先检查整机配件是否齐全。打开电源开关,即开始工作,工作时根据你手中的压力轻重,试管中的溶液均匀便能快能慢。使用试管和比色管,最好需混匀的溶液不超过试管的二分之一为最佳,需要均匀溶液较多时,请用三角瓶。为确保安全,使用结束时,请关闭电源,涡漩混匀器应保持清洁干燥,严禁溶液进入机内,以免损坏机件。
涡漩混匀器的使用注意事项:
1.使用该仪器时应放在较平滑的平面或者玻璃台面上。
2.如果开启电源开关后,电机若是无响应,应先检查插头接触是否良好,保险丝是否烧断(应断电进行)。
3.为了使涡漩混匀器工作时平衡性能好,避免产生较大振动,装瓶时应将所有试瓶分布均匀,各瓶的容液应大致相等。
4.接通电源,打开电源开关,指示灯亮,再对机器进行调速后,再按启动按钮,仪器启动完毕。
5.本仪器使用结束后要注意妥善保管,应放在干燥、通风、无腐蚀性气体的地方,使用中切勿使液体流入机芯,以免损坏器件。
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